Virus e batteri (Farsi unidea) (Italian Edition)

Fluorescenza verde indica virus trasdotte aree del midollo spinale. D l'immagine rappresentativa di una sezione trasversale attraverso un midollo spinale lombare AAV1-eGFP-trasdotte da un mouse di tipo selvatico. E immagine rappresentativa di una sezione trasversale di un AAV1. Le linee tratteggiate rappresentano la struttura della materia grigia e superficiale corno dorsale del midollo spinale.

C tre iniezioni di AAV1. Cre hanno portati a una profonda perdita di neuroni inibitori nei rispettivi segmenti del ipsilateral ma non del lato controlaterale. Cre topi iniettati con AAV1. E perdita di GlyT2 neuroni evocato comportamento avversivo spontaneo che ricorda del prurito cronico. F hM3Dq-ha mediato l'attivazione dei neuroni GlyT2 alleviato dolore meccanico nocivo evocato da stimolo di puntura di spillo.

G hM3Dq-ha mediato l'attivazione dei neuroni GlyT2 ridotto pruritogen clorochina o istamina -evocato comportamento avversivo. Le frecce indicano double-labeled astrociti nella lamina III. Questo protocollo consente la trasduzione dei tre principali segmenti spinali innervati dai neuroni sensoriali, estendendo loro assoni periferici per l'arto posteriore. Transducing tre segmenti produce dati comportamentali robusti e riproducibili.

il Mulino - Volumi - MAURILIO SAMPAOLESI

Ad esempio, lo stesso regime di iniezione consente di test la zampa von Frey, Hargreaves, ecc. Ci sono diversi passaggi critici per ottenere dati morfologici e comportamentali affidabile e per evitare artefatti. Danni al midollo spinale potrebbero compromettere sensazioni somatiche e coordinazione motoria del mouse, compromettendo qualsiasi pianificati esperimenti comportamentali. Tessuto spinale al sito di iniezione deve essere esaminata alla fine dell'esperimento per verificare successo iniezione e trasduzione del sito di inoculo e per escludere danni di tessuto in eccesso come conseguenza della chirurgia.

Diversi parametri del protocollo possono essere adattati alla popolazione neuronale e la domanda di ricerca per essere studiato. Ad oggi, sono stati utilizzati principalmente due tecniche funzionalmente interrogare i circuiti neuronali, necessari per la trasmissione dei segnali sensoriali.

Molti ricercatori hanno usato le iniezioni intraspinal di rAAV codifica per reporter ed effettrici proteine in topi che esprimono recombinase per etichettare e manipolare le sottopopolazioni neuronali spinali. Questo si ottiene inserendo due delle tre iniezioni nello spazio intervertebrale rostrale e caudale delle vertebre T13 e secondo, da un foro in T13 per la terza iniezione invece di rimuovere le vertebre. I segmenti mirati di L3-L5 sono l'area di terminazione principale dei neuroni sensoriali che innervano l'arto posteriore.

Qui, topi che esprimono una ricombinasi in un sottoinsieme specifico dei neuroni spinali devono essere attraversati per topi reporter al fine di ottenere l'espressione del marcatore desiderato o proteine effettrici nel sottoinsieme di un neurone rispettivi 17 , 18 , Allo stesso modo, Gutierrez-Mecinas et al. Dymecki e colleghi, come pure i gruppi di Ma e Goulding, hanno sviluppato modi eleganti dell'utilizzo di approcci basati su mouse Intersezionali reporter che evitare di ricombinazione in parti del sistema nervoso che deve rimanere inalterato 17 , 18 , 19 , 21 , 22 , Ringraziamo Hanns Ulrich Zeilhofer per sostenere generosamente questo lavoro.

Ringraziamo Carmen Birchmeier per l'anticorpo di Lmx1b. You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account. Skip to content Neuroscience. Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content. Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access: Attivazione di farmacogenetica guadagno di funzione Ordine pAAV.

Dopo aver ricevuto la cultura batterica pugnalata, striscia fuori batteri sulle piastre di LB agar batteriologico-grade disciolte in mezzo liquido Luria-Bertani completati con l'antibiotico adatto. Ablazione perdita di funzione Nota: Le tossine batteriche o tossina recettori utilizzabile per mediare ablazione delle cellule o il silenziamento di un neurone. Per generare un vettore virale Cre-dipendente, selezionare un vettore di Cre-dipendente con un promotore adatto ad es.

Amplificare la sequenza codificante di scelta ad es. Legare i frammenti purificati. Trasformare la reazione di legatura in batteri adatti, secondo il protocollo dato dal fornitore dei batteri competenti della scelta e i batteri sui piatti della libbra della lastra. Verificare successo clonazione di restrizione digest e sequenziamento del plasmide Estratto del DNA. Invia DNA amplificato ad un impianto di nucleo di vettori virali per la produzione di virus. Virus sono infettivi reagenti e devono essere smaltiti secondo le linee guida pertinenti. Il giorno dell'iniezione, sbrinamento un'aliquota di riserva del virus purificato desiderata sul ghiaccio e tenerlo su ghiaccio fino a quando non direttamente prima dell'iniezione.

Il titolo appropriato dipende gli obiettivi sperimentali e dovrebbe essere determinato sperimentalmente. Utilizzare un filamento riscaldatore di 3,0 mm e impostazioni di programma 00 con p a adattato come in tabella 1.

• Viruses and Bacteria;
• La Sardegna e i sardi (Italian Edition)!
• Ganz normal hochbegabt: Leben als hochbegabter Erwachsener (Fachratgeber Klett-Cotta) (German Edition)!
• The Forgotten Room - A Sequel to Frances Hodgson Burnetts The Secret Garden?

Usando un microscopio con una scala di micrometro, misurare il diametro interno di micropipette diversi per avere un'idea di quanto sia grande l'apertura dovrebbe essere, o misurare per ogni micropipetta. Non lasciare qualsiasi disinfettante sulla siringa microliter che danneggerebbe il vettore virale deve essere utilizzato. Preparazione dell'animale per la chirurgia e l'anestesia Nota: Scegli 6 - ai 10 - settimana-vecchi topi per facilitare la procedura chirurgica.

Qualsiasi ceppo ed entrambi i sessi possono essere utilizzati in linea di principio, ma utilizzano lo stesso ceppo di sfondo ad es. Se le differenze del sesso sono attesi o da indagare, analizzare i maschi e le femmine in gruppi separati. Monitorare il tasso di respirazione durante l'intervento chirurgico. Applicare unguento oculare lubrificante per prevenire la secchezza della cornea durante l'intervento chirurgico. Radere la parte posteriore dell'animale e rimuovere i capelli accuratamente con tessuti bagnati. Disinfettare la pelle rasata con soluzione di iodio e consentire la pelle si asciughi.

Dare il trattamento analgesico per esempio , 0.

Top Authors

Esposizione della colonna vertebrale a livello lombare del midollo spinale Nota: Sollevare la pelle con il forcipe e staccarlo dal muscolo sottostante con le forbici. Utilizzando una pinzetta e piccole forbici, fare un'incisione nel prossimo, sottile strato membranoso proprio accanto alla linea mediana e tagliarlo dai processi spinous. Identificazione delle vertebre a livello lombare del midollo spinale Nota: Tirare la pelle indietro verso la coda per esporre la cresta iliaca. Conta all'indietro in un caudale alla direzione rostrale per identificare la vertebra di interesse. Palpare lungo la colonna vertebrale.

La vertebra T13 si trova appena rostrale. Il segmento di midollo spinale lombare L4 si trova all'interno di questa vertebra. Fissazione della colonna vertebrale e l'esposizione del midollo spinale lombare Metti l'animale su un cuscino di tessuti arrotolati per elevarlo ai morsetti spinali della cornice stereotassica. Per questo scopo, allineare i morsetti adiacenti alla vertebra destinazione, fissare un morsetto in posizione e tenere la colonna vertebrale con forcipe Adson mentre il secondo morsetto di fissaggio.

La colonna dovrebbe essere perpendicolare al piano di iniezione e saldamente fissati in modo che non si muove su pressione dall'alto. Rimuovere il muscolo paraspinous sopra le vertebre di interesse. Utilizzare pinze necessari per rimuovere il tessuto rimanente sulla vertebra o sopra la dura madre nello spazio intervertebrale.

Nello spazio intervertebrale, il vaso sanguigno dorsale dovrebbe essere visibile la marcatura della linea mediana del midollo spinale. Per preparazioni iniettabili unilaterale, eseguire un laminectomy parziale da un foro nel mezzo del lato destinazione della vertebra. Utilizzare un bene Odontoiatria apparecchi con una fresa sferica di 0,5 mm di perforazione e forare con particolare attenzione quando ci si avvicina al midollo spinale.

Rimuovere eventuali frammenti di osso restante con un ago smussato 26G per esporre il midollo spinale. Liquido cerebrospinale dovrebbe essere fuoriuscita dai fori e il midollo spinale dovrebbe essere leggermente sporgenti. Preparazione della siringa di iniezione Nota: La siringa di iniezione dovrebbe essere preparata immediatamente prima dell'inizio dell'iniezione per ridurre il rischio di intasamento la micropipetta di particelle di polvere.

MICHELE LA PLACA

Per visualizzzare l'anteprima utilizza uno dei seguenti browser. Attraverso gli ebook, il Mulino propone una parte significativa del proprio catalogo in edizione digitale. Disponibili in questo sito e nei principali shop online, sono in formato epub e mobi e possono essere letti sui principali reader - compreso il Kindle -, sui tablet - compreso l'Ipad -, negli smartphone e su computer.

Organi sociali La storia Scelte editoriali Il gruppo del Mulino. Rivisteweb Club Abbonati Annali.

New and forthcoming Backlist. Servizi Newsletter Appuntamenti Promotions. Le cellule staminali embrionali III. Le cellule staminali adulte IV. La riprogrammazione cellulare VI.